Cara Mendeteksi CRISPR dengan CRISPR – Menggunakan SHERLOCK untuk Tujuan Kontrol Doping
Uncategorized

Cara Mendeteksi CRISPR dengan CRISPR – Menggunakan SHERLOCK untuk Tujuan Kontrol Doping

Kit alat pengulangan palindromik pendek/CRISPR-associated (CRISPR/Cas) yang terkelompok secara teratur merupakan salah satu teknik pengeditan gen yang paling sering digunakan saat ini. Pengeditan hampir semua urutan DNA dapat diwujudkan, karena penelitian yang berkembang pesat ke berbagai efektor Cas dan jangkauan target mereka yang terus berkembang. Selain itu, kesederhanaan dan efektivitas biaya alat CRISPR tersebut, sayangnya, juga dapat memfasilitasi penggunaan CRISPR/Cas secara ilegal untuk mencapai peningkatan kinerja di antara para atlet. Akibatnya, ada kebutuhan mendesak untuk deteksi langsung metode CRISPR/Cas yang diterapkan secara ilegal dalam sampel kontrol doping, di mana strategi yang menjanjikan disajikan di sini menggunakan Specific High Sensitive Enzymatic Reporter UnLOCKing (SHERLOCK) untuk deteksi asam nukleat yang ditargetkan. Metode analitik dikembangkan yang memungkinkan deteksi sgRNA yang terkait dengan Cas9 dari Streptococcus pyogenes (SpCas9) dalam sampel serum dengan menggunakan reverse transcriptase-recombinase polymerase amplification (RT-RPA) dan deteksi asam nukleat kualitatif berikutnya melalui SHERLOCK dalam kombinasi dengan komplementer prosedur skrining berbasis gel untuk mengungkap upaya doping dengan kompleks CRISPR ribonucleoprotein (RNP) yang dimediasi lipid. Karakterisasi metode kualitatif awal mengkonfirmasi spesifisitas kedua prosedur dan menetapkan sensitivitas deteksi 10 nM urutan target yang tidak dikomplekskan dan 100 pM sgRNA dalam bentuk kompleks RNP. Lebih lanjut, sebuah studi adimistrasi bukti konsep in vivo yang mensimulasikan skenario doping gen hipotetis menggunakan model tikus mengungkapkan jendela deteksi 8 jam setelah injeksi intravena, mendukung penerapan utama dari strategi pengujian untuk sampel kontrol doping otentik di masa depan.

Posted By : angka keluar hongkong