Identifikasi dua isoform SPRY dari SPRY1 dan SPRY3 dengan mikroskop gaya atom pada tingkat molekul tunggal

Laporan yang berkembang menunjukkan bahwa isoform Sprouty (SPRY) bertindak sebagai penghambat atau promotor dalam berbagai jenis kanker. Dan terjadinya kanker yang berbeda mungkin terkait dengan ekspresi abnormal dari salah satu subtipe SPRY. Identifikasi isoform SPRY dengan demikian memainkan peran yang sangat penting dalam menentukan isoform mana yang ekspresi menyimpangnya menghambat atau mempromosikan kanker. Tetapi sifat mereka sendiri, seperti kesamaan dalam struktur dan berat molekul, membuat identifikasi menjadi sangat sulit. Pada artikel ini, kami mengusulkan metode baru untuk mengidentifikasi isoform SPRY menggunakan mikroskop gaya atom (AFM) dengan mengamati pengikatan diferensial dari berbagai isoform SPRY ke albumin serum sapi (BSA), yang dapat digunakan untuk membedakan isomer SPRY pada tingkat molekul tunggal. . Pengikatan spesifik SPRY1 dan BSA diamati oleh AFM. Pengurangan jumlah molekul protein monomer yang disebabkan oleh penipisan sebagian kedua protein ini selama pengikatan juga konsisten dengan melemahnya pita protein monomer pada elektroforesis gel natrium dodesil sulfat poliakrilamida (SDS-PAGE). Pada saat yang sama, susunan dua protein dalam kompleks yang terikat erat juga diamati. Namun, isoform SPRY3 tidak berinteraksi dengan BSA untuk menyebabkan agregasi, dan diameter serta tinggi kedua protein tidak berubah secara signifikan dibandingkan sebelum reaksi. Dengan cara ini, dengan partisipasi BSA, dua isoform, SPRY1 dan SPRY3, dapat diidentifikasi dan dipisahkan menggunakan mikroskop gaya atom. Selain itu, hasil eksperimen bahwa pembentukan kompleks SPRY1-BSA secara selektif dapat mengurangi konsentrasi isoform SPRY1 di lingkungan juga akan berkontribusi pada penelitian masa depan tentang obat antikanker yang dipengaruhi oleh SPRY1.