Breaking News

Partikel Magnetik Kitosan Sumber Daya Terbatas yang Dapat Disiapkan untuk Mengekstraksi Asam Nukleat Siap Amplifikasi dari Biofluida Kompleks

Ekstraksi dan konsentrasi asam nukleat murni dari biofluida kompleks merupakan prasyarat untuk aplikasi uji amplifikasi asam nukleat (NAAT) dalam deteksi patogen, pencegahan biowarfare, dan penyakit genetik. Namun, ekstraksi asam nukleat yang dimediasi spin-column konvensional dibatasi oleh persyaratan infrastruktur lab terpusat yang mahal dan intensif daya, membuatnya tidak cocok untuk pengaturan sumber daya terbatas. Kemajuan yang signifikan pada perangkat lab-on-a-chip atau kartrid (misalnya, Cepheid GeneXpert®) yang mengintegrasikan ekstraksi asam nukleat dan amplifikasi telah dibuat, tetapi pendekatan ini memerlukan peralatan tambahan atau mahal. Demikian pula, kompleksitasnya membuat mereka sulit untuk dibuat dalam pengaturan sumber daya rendah oleh pengguna akhir itu sendiri. Penerapan partikel magnetik seperti manik-manik oksida besi berlapis silika untuk ekstraksi asam nukleat relatif bebas instrumen, cepat, mudah digunakan, dan dapat diotomatisasi. Tapi, mereka mengandalkan kimia garam chaotropic yang berbahaya dan penghilangan garam etanol yang dapat membatasi kemanjurannya untuk NAAT hilir. Kemajuan terbaru dalam beberapa jenis bahan baru (misalnya, poliamina) yang dilapisi manik-manik magnetik berbasis metode ekstraksi bebas garam chaotropic menawarkan solusi yang mungkin untuk masalah ini. Namun, bahan-bahan ini juga melibatkan sintesis multilangkah yang tidak diizinkan dalam pengaturan sumber daya terbatas. Untuk menawarkan kemungkinan ekstraksi asam nukleat berbasis partikel magnetik bebas instrumen yang dapat dilakukan pada pengaturan sumber daya terbatas, kami menyelidiki kemampuan menangkap asam nukleat dari dua sintesis partikel magnetik berlapis kitosan yang dapat disiapkan oleh personel terlatih minimal hanya menggunakan penangas air dan magnet pengaduk dalam waktu 6 – 8 jam. Kami secara kuantitatif menyelidiki efisiensi dari magnetocapture DNA pasif (tanpa goyangan listrik atau vortex-aided) (yaitu, mengikat partikel magnetik kitosan, pemisahan fisik dari sampel asalnya, dan pelepasan dari partikel) menggunakan UV260. Untuk mengeksplorasi kesesuaiannya terhadap NAAT hilir sensitif yang relevan secara klinis, 100 – 1000 salinan (yaitu, dalam urutan zeptomol) Escherichia coli (E. coli) atau DNA genom manusia dari larutan berair, lisat sel kasar, dan serum sapi janin diekstraksi oleh mereka dan kemudian berhasil dideteksi menggunakan kuantitatif real-time loop-mediated isothermal amplification (LAMP) atau real-time polymerase chain reaction (PCR). Selain itu, kesesuaiannya dengan LAMP berbasis gel, LAMP kolorimetri, dan LAMP in situ (pada manik-manik) juga diselidiki. Optimalisasi yang diperlukan dari metode amplifikasi telah dibahas. Secara keseluruhan, waktu penyelesaian untuk magnetocapture yang dikombinasikan dengan NAAT adalah 1,5 – 2 jam dan dengan demikian diharapkan dapat membantu pengambilan keputusan klinis yang cepat. Dengan kemudahan persiapan, reproduktifitas, dan kompatibilitas dengan NAAT hilir, kami mengantisipasi bahwa partikel magnetik ini akan memfasilitasi perluasan dan desentralisasi diagnosis berbasis asam nukleat untuk pengaturan sumber daya terbatas.

Posted By : angka keluar hongkong