Partikel magnetik kitosan yang dapat disiapkan dengan sumber daya terbatas untuk mengekstraksi asam nukleat siap amplifikasi dari biofluida kompleks
Breaking News

Partikel magnetik kitosan yang dapat disiapkan dengan sumber daya terbatas untuk mengekstraksi asam nukleat siap amplifikasi dari biofluida kompleks

Ekstraksi dan konsentrasi asam nukleat murni dari biofluida kompleks merupakan prasyarat untuk aplikasi uji amplifikasi asam nukleat (NAAT) dalam deteksi patogen, pencegahan biowarfare, dan penyakit genetik. Namun, ekstraksi asam nukleat yang dimediasi spin-column konvensional dibatasi oleh persyaratan infrastruktur lab terpusat yang mahal dan intensif daya, sehingga tidak cocok untuk pengaturan sumber daya terbatas. Kemajuan signifikan dalam perangkat atau kartrid lab-on-a-chip (misalnya, Cepheid GeneXpert®) yang mengintegrasikan ekstraksi dan amplifikasi asam nukleat telah dibuat, tetapi pendekatan ini memerlukan peralatan tambahan atau mahal. Demikian pula, kompleksitasnya membuat mereka sulit untuk dibuat dalam pengaturan sumber daya rendah oleh pengguna akhir itu sendiri. Penerapan partikel magnetik seperti manik-manik oksida besi berlapis silika untuk ekstraksi asam nukleat relatif bebas instrumen, cepat, mudah digunakan, dan dapat diotomatisasi. Tapi, mereka mengandalkan kimia garam chaotropic yang berbahaya dan penghilangan garam etanol yang dapat membatasi kemanjurannya untuk NAAT hilir. Kemajuan terbaru dalam beberapa jenis bahan novel (misalnya, poliamina) dilapisi metode ekstraksi bebas garam chaotropic berbasis manik magnetik menawarkan solusi yang mungkin untuk masalah ini. Namun, bahan-bahan ini juga melibatkan sintesis multilangkah yang tidak diizinkan dalam pengaturan sumber daya terbatas. Untuk menawarkan kemungkinan ekstraksi asam nukleat berbasis partikel magnetik bebas instrumen yang dapat dilakukan pada pengaturan sumber daya terbatas, kami menyelidiki kemampuan menangkap asam nukleat dari dua partikel magnetik berlapis kitosan yang dapat disiapkan oleh personel terlatih minimal hanya menggunakan penangas air dan magnet pengaduk dalam waktu 6-8 jam. Kami secara kuantitatif menyelidiki efisiensi magnetocapture DNA pasif (tanpa pengocokan listrik atau bantuan pusaran) (yaitu, pengikatan partikel magnetik kitosan, pemisahan fisik dari sampel asal, dan pelepasan dari partikel) menggunakan UV260. Untuk mengeksplorasi kesesuaiannya terhadap NAAT hilir sensitif yang relevan secara klinis, 100–1000 salinan (yaitu, dalam orde zeptomol) dari Escherichia coli (E. coli) atau DNA genom manusia dari larutan berair, lisat sel kasar, dan serum janin sapi diekstraksi oleh mereka dan kemudian berhasil dideteksi menggunakan amplifikasi isotermal yang dimediasi loop real-time kuantitatif (LAMP) atau reaksi berantai polimerase waktu-nyata (PCR). Selain itu, kesesuaiannya dengan LAMP berbasis gel, LAMP kolorimetri, dan di tempat (pada manik-manik) LAMP juga diperiksa. Optimalisasi yang diperlukan dari metode amplifikasi telah dibahas. Secara keseluruhan, waktu penyelesaian untuk magnetocapture yang dikombinasikan dengan NAAT adalah 1,5-2 jam dan dengan demikian diharapkan dapat membantu dalam pengambilan keputusan klinis yang cepat. Dengan kemudahan persiapan, reproduktifitas, dan kompatibilitas dengan NAAT hilir, kami mengantisipasi bahwa partikel magnetik ini akan memfasilitasi perluasan dan desentralisasi diagnosis berbasis asam nukleat untuk pengaturan sumber daya terbatas.

Posted By : angka keluar hongkong