Penilaian eksitasi bergeser spektroskopi perbedaan Raman dalam sampel biologis yang sangat fluoresen

Eksitasi yang bergeser Spektroskopi perbedaan Raman (SERDS) dapat digunakan sebagai teknik koreksi dasar instrumental untuk mengambil pita Raman dalam sampel yang sangat berfluoresensi. Genipin (GE) cross-linked equine pericardium (EP) digunakan sebagai sistem model karena pigmen biru terbentuk pada cross-linking, yang menghasilkan latar belakang fluoresen yang kuat dalam spektrum Raman. EP dihubungkan silang dengan larutan GE 0,25% selama 0,5 jam, 2 jam, 4 jam, 6 jam, 12 jam, dan 24 jam, dan dibandingkan dengan EP yang tidak diobati. Spektrum Raman dikumpulkan dengan tiga panjang gelombang eksitasi yang berbeda. Untuk penilaian teknik SERDS, spektra SERDS yang telah diproses sebelumnya dari dua panjang gelombang eksitasi (784 nm-786 nm) dibandingkan dengan spektra Raman yang dikoreksi baseline matematis pada eksitasi 785 nm menggunakan koreksi sinyal multiplikatif yang diperluas, karet gelang, puncak iteratif nonlinier yang sensitif dan algoritma pemasangan polinomial. Sedangkan setiap koreksi dasar memberikan spektrum kualitas buruk di luar ikatan silang GE 6 jam dengan artefak seperti gelombang, teknik SERDS menghasilkan spektrum yang berbeda, yang memberikan spektrum yang direkonstruksi unggul dengan kolagen yang jelas dan pita pigmen GE yang ditingkatkan resonansi dengan standar deviasi yang lebih rendah. Kunci untuk kemajuan ini adalah pendekatan pengoptimalan perbedaan tingkat lanjut yang dijelaskan di sini. Selanjutnya, hasil teknik SERDS tidak tergantung pada kalibrasi intensitas karena respon transfer sistem dikompensasikan dengan menghitung perbedaan spektrum. Kami menyimpulkan bahwa strategi SERDS ini dapat ditransfer ke studi Raman pada sampel biologis dan non-biologis dengan latar belakang fluoresensi yang kuat pada 785 nm dan juga panjang gelombang eksitasi yang lebih pendek yang mendapat manfaat dari intensitas hamburan yang lebih intens dan efisiensi kuantum yang lebih tinggi dari detektor CCD.